過敏源試劑采用親和素-生物素化過敏原抗原預(yù)包被板ELISA原理,檢測人血清/血漿中存在的針對特異性過敏原IgE抗體,配以酶標記抗人IgE單克隆抗體作為標記物。加入底物TMB顯色后終止反應(yīng),在450nm波長測各孔O.D值,O.D值的大小與待檢抗體含量成正比。
過敏源試劑主要組成成分:
檢測板:包被有過敏原和生物素標記的牛血清白蛋白(陽性質(zhì)控,位于每條試劑條的較上端)的硝酸纖維素膜,置于塑料反應(yīng)槽中;
洗脫液:(TRIS/NaCl,包含NaN3),可稀釋的清洗液;標記有生物素的抗人IgE抗體(多抗),含NaN3;酶標鏈霉親和素,連接有堿性磷酸酯酶的鏈霉親和素(含C4H5NOS和C4H6BrNO4);底物,BCIP/NBT(5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽/氯化硝基四氮唑藍)。
過敏源試劑的試驗操作:
試劑盒中的所有成分必須是同一批。過期時請勿使用。使用前須平衡至18~30C.
1.去掉尾端的白色封頭和頂端的紅蓋,讓反應(yīng)管內(nèi)的緩沖液排出。用紗布擦試細頭。
2.將注射器接在反應(yīng)管的頂端,將標本由細頭抽到注射器接頭
3.將反應(yīng)管平放,在室溫下(18-30C)反應(yīng)100分鐘。
4.將標本從反應(yīng)管排出,抽出注射器的推桿,由注射器針簡向反應(yīng)管內(nèi)注入1毫升(4項組合產(chǎn)品為0.8m)清洗液,將注射器的推桿插入并推到底,用紗布擦試細頭。
5.將綠色的結(jié)合液由細頭抽到注射器的接頭處。
6.將反應(yīng)管平放,在室溫下(18~30C)反應(yīng)100分鐘或16小時。
7.將結(jié)合液由反應(yīng)管排出,抽出注射器的推桿。加五濉清洗液到注射器針簡中,讓它流下。再在注射器針簡內(nèi)注入1毫升(4項組合產(chǎn)晶為0.8m1)清洗液,讓它流過反應(yīng)管。將注射器的推桿插入并推到底,用紗布擦試細頭。
8.在塑料燒杯中注入少量(約2毫升,4項組合產(chǎn)品為1.5ml)清洗液。通過反應(yīng)管將清洗液抽到注射器中。抽出注射器的推桿,讓清洗液流出。9.在注射器針簡內(nèi)注入1毫升(4項組合產(chǎn)F品為0.8m)清洗液,讓它自然流下。重復(fù)一次。將注射器的推桿插入并推到底,用紗布擦試細頭。
10.將黃色的底物/指示劑通過反應(yīng)管抽到注射器中。
11.平放反應(yīng)管,強陽性標本在5分鐘內(nèi)可觀察由黃到紫的顏色變化,弱陽性標本在90分鐘內(nèi)觀察顏色變化。